کلونینگ و تولید نوترکیب آنزیم گرانزیم m انسانی
نویسندگان
چکیده
زمینه و هدف: گرانزیم m یکی از اعضای خانواده ی سرین پروتئازهاست که درلنفوسیت های t سیتوتوکسیک و سلول های nk بیان می شود. گرانزیم m یک القاکننده ی آپوپتوز در سلول های توموری هدف می باشد. بنابراین با توجه به اهمیت گرانزیم m در آپوپتوز، هدف از این تحقیق تولید آنزیم فعال به لحاظ زیستی می باشد . روش بررسی: قطعهcdna مربوط به گرانزیم m فعال به درون ناقل بیانی pet21a(+) کلون و ناقل نوترکیب جهت بیان پروتئین، به سلول های مستعد با روش شوک حرارتی منتقل گردید. جهت بیان بالای پروتئین، شرایط القا بهینه گردید و سپس آنالیز پروتئین توسط sds-page انجام گرفت. سپس انکلوژن بادی های تولیدی در بافر حاوی اوره 8 مولار حل شده و با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی نیکل-آگارز خالص شد. فعالیت پروتئازی گرانزیم m با استفاده از سوبسترای کازئین و با روش اسپکتروفتومتری (طیف سنجی) سنجیده شد. یافته ها: گرانزیم m نوترکیب در باکتری e. coli به صورت انکلوژن بادی تولید شد و بهترین سطح بیان در دمای 22 درجه ی با غلظت 1 میلی مولار از iptg در طول 5 ساعت است. با استفاده از ستون نیکل- آگارز و شیب غلظت اوره، گرانزیم m به طور همزمان با تاخوردن، خالص گردید. نتایج حاصل از تعیین فعالیت نشان داد که آنزیم در حضور سوبسترای کازئین فعال بوده و فعالیت ویژه اش 71 واحد بر میلی گرم است. فعال بودن گرانزیم m نشان دهنده ی این بود که آنزیم تاخوردگی درستی پیدا کرده است. نتیجه گیری: با توجه با اینکه گرانزیم m می تواند هدفی بالقوه برای داروهای ضد سرطان باشد، بنابراین روش پیشنهادی در این تحقیق می تواند تسهیل کننده مطالعه بیشتر بر روی این آنزیم باشد.
منابع مشابه
کلونینگ و تولید نوترکیب آنزیم گرانزیم M انسانی
Background and Objective: Granzyme M is a member of a granule serine proteases family, which is mainly expressed by cytotoxic T lymphocytes and natural killer cells. Granzyme M appears to be a potent inducer of tumor cell apoptosis. With respect to the importance of Granzyme M in the apoptosis, the aim of this work was the production of the biologically active enzyme. Materials and Methods: ...
متن کاملکلونینگ، بیان، خالص سازی و ارزیابی آنزیم لیزواستافین نوترکیب با استفاده از سیستم کلونینگ pBAD
Background and purpose: Staphylococcus aureus is an important nosocomial pathogen which causes some diseases such as endocarditis, osteomyelitis, pneumonia, toxic shock syndrome, and food poisoning. The excessive and inappropriate use of antibiotics in the treatment of these diseases causes resistance to many antibiotics. Lysostaphin is an effective agent in the treatment of staphylococcal infe...
متن کاملکلونینگ و بیان اریتروپویتین نوترکیب انسانی در Leishmania tarentolae
زمینه و هدف : پروتئین اریتروپویتین انسانی هورمونی گلیکوزیله با وزن مولکولی 40 کیلو دالتون است که در کلیه سنتز شده و در تکثیر و تمایز اریتروسیت‌ها نقش دارد. این پروتئین دارویی با نام تجاری «اپویتین» شناخته شده و کاربرد موثری در درمان آنمی، سرطان و عفونت‌های ناشی از HIV ایفاء می‌کند. این مطالعه به منظور ارزیابی استفاده از میزبان انگلی لیشمانیا تارانتولا (Leishmania tarentolae) به منظور تولید فرم ...
متن کاملکلونینگ و بررسی بیان ژن کد کننده BMP-2 انسانی در باکتری E. coli به منظور تولید یک داروی نوترکیب
Introduction & Objective: Bone morphogenetic proteins are a group of cytokines that belongs to superfamily TGFβ. These proteins play an important role in evolution of many of organs and tissues through germinal period followed by amending and rebuilding of bone tissue and car-tilage. The aim of this study was to clone and expression analysis of BMP-2 gene in E. coli bacteria. Materials & Method...
متن کاملکلونینگ و بیان ژن آنزیم ضد قارچ نوترکیب کیتیناز باسیلوس پومیلوس در باسیلوس سوبتیلیس 168
سابقه و هدف: کیتین، پلی ساکارید خطی و یکی از فراوان‌ترین پلی ساکاریدهای طبیعی است که جزء اصلی ساختار دیواره سلولی بسیاری از موجودات است. کیتینازها، آنزیم‌های اصلی کاتالیز‌کننده کیتین به اجزاء مونومری و الیگومری آن هستند و می‌توانند به عنوان یک عامل ضد قارچ طبیعی استفاده شوند. هدف از این تحقیق کلونینگ و بیان ژن نوترکیب کیتیناز در باکتری باسیلوس سوبتیلیس در درمان عفونت‌های قارچی و جای‌گزینی آن...
متن کاملکلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب زیرواحد بتای هورمون TSH انسانی (TSHβ) و ارزیابی آنتیژنیسیته آن
Background and purpose: Measurement of thyroid stimulating hormone (TSH), usually through RIA and ELISA tests, is very useful for the diagnosis of thyroid disorders. Considering the structural similarity between alpha chain of TSH and the three glycoprotein hormones of luteinizing hormone, follicle stimulating hormone, and chorionic gonadotropin (CG), in this study, we aimed to examine the prod...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
عنوان ژورنال:
مجله دانشگاه علوم پزشکی زنجانجلد ۲۳، شماره ۱۰۰، صفحات ۵۳-۶۴
کلمات کلیدی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023